ПЦР у женщин

Никому не понравится такая щепетильная тема для разговора как тема про инфекции передающиеся половым путем (ИППП). Все мы сразу отнекиваемся, клянемся в своем целомудрии и божимся, что уж я то точно ничем не болею. А ты уверен? Ты уверен, что у тебя или твоего партнера ничего нет? Многие инфекции довольно долго могут протекать бессимптомно. Поэтому так важно следить за своим здоровьем и проверять его. Поможет же нам в этом такой анализ как ПЦР-диагностика.

Что это такое и как проводится?

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Если простыми словами, этот анализ помогает нам распознать половые инфекции, которые не увидишь в стандартном мазке на микрофлору.

Есть разные анализы на ПЦР-диагностику ИППП. Зависит это от количества инфекций, которые вы хотите проверить. Самый большой — ПЦР-13 содержит следующие показатели:

анализ ПЦР-13 количественный

Так же бывает качественный и количественный анализ ПЦР. Это значит, что в первом случае просто будет ответ — обнаружено или нет, а во втором — если обнаружено, то укажут в каком количестве. Я предпочитаю сдавать сразу количественный, тем более он не намного дороже.

ЗАБОР БИОМАТЕРИАЛА И ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ.

Стандартно у мужчин и женщин забор анализа делают из уретры. Это очень неприятно. После такого в течении дня болезненно ходить в туалет, возникает резкая колющая боль, но это быстро проходит.

Перед анализом необходимо 2-х дневное воздержание от половой жизни. За 2 часа до него нельзя мочиться.

Для женщин существует так же второй вариант сдачи — мазок из цервикального канала. Подготовка — все тоже воздержание от секса, а вот сходила ты в туалет или нет — роли не играет. Так же нельзя использовать вагинальные свечи и делать спринцевания в течении все тех же двух дней.

Еще одно важное условие — не стоит сдавать ПЦР за 5 дней до предполагаемых месячных и через несколько дней после них. В противном случае результат может быть недостоверным.

МОЯ ИСТОРИЯ .

Впервые я столкнулась с этим анализом в 2012 году, когда ни с того ни с сего начали донимать неприятные выделения с луковым запахом. Да, тема неприятная. Тогда доктор сразу что-то заподозрил и направил в лабораторию с соответствующим списком предполагаемых инфекций. Через 3 дня я уже знала результат — у меня оказалась уреаплазма. Пролечила, но на повторный мазок после полного курса лечения не пошла. Честно сказать, я просто замоталась и забыла за него. А зря! Потому что через 2 года на плановом осмотре в стандартном мазке на микрофлору обнаружили большое количество лейкоцитов. Лечили одним, потом другим, а они все не снижались. Направили на полный анализ ПЦР. И что же вы думаете? Снова уреаплазма. Видимо тогда не долечила, и она стала протекать бессимптомно. Вот почему так важно сдавать повторный анализ по истечении определенного времени после лечения, чтобы клетки успели обновиться и вы знали точно — помогло или нет. На этот раз я уже ничего не забыла и получила приятные новости — не обнаружено.

Далее следовали несколько лет затишья, и вот в прошлом году мне снова пришлось сдать полный ПЦР. Все потому что сейчас я прохожу химиотерапию, и резко начались неприятные симптомы в виде слабого жжения и сухости. Мазок снова показал просто огромное количество лейкоцитов. Мой гинеколог сказала, что это так называемый дисбактериоз влагалища, но я решила перестраховаться и сдала ПЦР-диагностику. Зачем? Была неприятная история — узнала, что бывший молодой человек мне изменял, и теперь не могла с уверенностью сказать, что я «чистенькая».

ПЦР-13 с количественным результатом обошелся мне чуть больше 3-х тысяч рублей. И вот такие результаты мне пришли через 3 дня…

Результаты ПЦР-диагностики на ЗППП

Как попой чуяла!

Наличие гарднерелы говорит о дисбактериозе, то есть нарушении микрофлоры, которую мы поправили следующим лечением:

  1. Клиндацин Б Пролонг Крем — 3 дня.
  2. Затем Ацилакт — 10 дней — для восстановления микрофлоры поле местного антибиотика.

Что меня поразило больше всего, так это положительный результат на ВПЧ 18 типа. КАК?! ОТКУДА?! Раньше же его не было! Ответ неоднозначен — либо я действительно заразилась. Либо в моей ситуации может быть еще один вариант — этот вирус мог быть во мне давно, как и любой другой, но так сказать в спящем состоянии, то есть в таких малых количествах, что аппарат по ПЦР-диагностике попросту мог его не распознать. И вот когда у меня началась химия, иммунитет стал стремительно падать, на этом фоне вирус мог расплодиться.

Мой гинеколог отказывалась верить в результат анализа, потому что этот ПЦР я сдавала из уретры, а на ВПЧ 18 лучше делать из цервикального канала, потому что именно шейка матки место его обитания. Отправила пересдавать уже только на него и из цервикального канала.

На этот раз я пошла в другую лабораторию — Инвитро. Отдельно анализа на ВПЧ 18 у них не было, только в комплексе на 4 типа — ВПЧ 6, 11, 16, 18. Стоил 880 рублей.

Ну что ж, вот результаты.

ПЦР на ВПЧ

Количество немного отличается, но по факту результат один — положительно.

Конечно же я его лечила и совсем скоро предстоит повторная сдача анализа. Надеюсь все будет хорошо.

Дополнение после лечения ВПЧ 18 — лечение было успешным.

  • ПОДВЕДЕМ ИТОГИ

Достоинства ПЦР-диагностики:

— быстро

— точно

— большой охват ИППП

Недостатки:

— сдача из уретры неприятна и болезнена

— если брать полный список инфекций, стоимость все-таки не маленькая

— если инфекция в «спящем состоянии», то может быть не распознана

ПЦР-диагностика — очень важный и нужный анализ, так как многие ИППП могут протекать у вас или вашего партнера абсолютно бессимптомно. Перед сдачей анализа конечно же лучше посоветоваться с врачом, чтобы решить на что и откуда лучше его сдавать.

Всем здоровья и только хороших результатов.

Так же мои отзывы на лекарственные средства:

  • Мой опыт с гормональной спиралью Мирена
  • Тест для определения В-гемолитического стептококка группы А — как легко и просто в домашних условиях определить наличие стрептококка
  • Быстрый помощник при простуде на губах — Зовиракс Дуо-Актив
  • Таблетки для рассасывания Доритрицин — при болях в горле № 1
  • Церукал — быстрая и качественная помощь при тошноте и рвоте

Принцип ПЦР- исследования

У каждого живого существа, по крайней мере, на нашей планете, есть уникальный «отпечаток» — ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), которая отвечает за передачу наследственных факторов от предков к потомкам. Структурно эта молекула представляет собой две нити из молекул-азотитых оснований, удерживаемые рядом друг с другом химическими связями и скрученные в спираль (считается, что для компактности). Из курса биологии вы можете помнить такие названия, как аденин (А), гуанин (Г), тимидин (Т) и цитозин (ц). Это 4 нуклеотида, которые и создают последовательность ДНК. Вирусы хранят свою генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте – РНК.
Информация об уже изученных ДНК и РНК хранится в научных базах лабораторий. После того, как был изобретен метод ПЦР, для многих возбудителей различных заболеваний (бактерии, грибки и вирусы) были созданы свои специфические генетические детекторы (праймеры) — уникальные последовательности нуклеотидов, характерных только для конкретного возбудителя. И если поместить их в пробирку с исследуемым материалом, при наличии в нем ДНК или РНК «живых» возбудителей, праймеры запускают реакцию репликации – создания огромного числа копий, которое можно идентифицировать визуально. Т.е. они начинают копировать свою ДНК/РНК десятки раз.
И при подсчете результатов сотрудники лаборатории могут понять, есть ли искомые бактерии и вирусы в исследуемом образце, или нет, именно поэтому результаты ПЦР чаще всего качественные, т.е. «обнаружено» или «не обнаружено».

Кому мы обязаны появлением метода ПЦР?

Со слов американского биохимика Керри Мюллиса (Kary Mullis), идея идентифицировать живые организмы по короткому участку их генетического кода (ДНК) пришла ему в голову в 1983 году, по пути с работы домой. А в основе этой идеи, лежала работа другого американского биохимика, Артура Корнберга (Arthur Kornberg), которая в свое время не нашла отклика у научного сообщества.

Керри допустил возможность того, чтобы взять молекулу ДНК какого-либо организма, с помощью высокой температуры «распустить» ее спираль на две нити, специфическими маркерами-праймеры пометить уникальные для этого микроорганизма участки ДНК и затем, применив фермент ДНК-полимеразу, создать из двух нитей две новые молекулы ДНК. Но уже содержащие в себе меченные праймеры. И потом останется просто искать эти участки в диагностическом материале.

В итоге, корпорация CETUS, в которой работал Мюлис, выделила ему команду ученых. И в 1985 году, в издании Американского общества генетики человека, появилась публикация с теоретическим обоснованием ПЦР, как метода идентификации генетического материала живых организмов.

Преимущества методики ПЦР

Всего разработано более 10 разных методик амплификации, применяемых лабораториями в зависимости от исходных условий и поставленных целей.
Общим для них есть высокая чувствительность (для положительного результата достаточно 40 (!) или менее искомых копий ДНК в 1 мл образца, то есть вероятность ложноотрицательного ответа ничтожно мала. И очень высокая специфичность: вероятность ложноположительного ответа составляет менее 1%.
Но точность результатов сильно зависит от качества сбора диагностического материала, тщательного соблюдения всех технических требований к каждому этапу и качеству оборудования, расходных материалов (буфера, праймеров, раствора для отмывки и т.д.).

Области применения в медицине

В дерматовенерологии ПЦР используют для выявления венерических заболеваний: микоплазменной, хламидийной инфекций, сифилиса, генитального герпеса и др.
Инфекционисты активно используют ПЦР для диагностики туберкулеза, ВИЧ, вирусных гепатитов, герпеса, мононуклеоза, вируса Эпштейн-Барр и др.). А с помощью ПЦР в реальном времени, оценивая вирусную нагрузку, врачи могут составить мнение о динамике заболевания, отклике на лечение, что особенно актуально для пациентов с ВИЧ, принимающих терапию.
Также благодаря ПЦР врачи могут в течение нескольких дней с уверенностью идентифицировать коклюш и паракоклюш, выявить возбудителей эпидемии ОРВИ. Уточняются типы вируса гриппа, циркулирующие на определенной территории, на основании чего появляется возможность разработать эффективную вакцину для каждого сезона гриппа.
В течение суток или быстрее можно установить вид возбудителя кишечной инфекции, а значит – назначить адекватное лечение и обнаружить вероятный источник заражения.
Летом, ПЦР актуальна для диагностики заболеваний, передаваемых иксодовыми клещами: боррелиоза (болезни Лайма), клещевых энцефалитов.
Метод позволяет работать с любым биологическим материалом. Гемотрансмиссивные инфекции (сифилис, ВИЧ, гепатиты, боррелиоз) исследуются по пробе венозной крови или спинномозговой жидкости. Кожные болезни (герпес, грибки) – по соскобу с пораженного участка. Венерические и урологические – по образцу мочи, спермы, влагалищного отделяемого.
Так что в медицине, ПЦР применяется везде, где нужна высокая точность и быстрота получения результатов.

Лабораторные исследования, выполняющиеся методом ПЦР:

пцр диагностика на Инфекции:

Области применения анализа

В настоящее время в медицине и криминалистике, а также для клонирования генов и установления родственных связей применяют более десятка разновидностей амплификации. В ежедневной практике кровь на ПЦР назначают медицинские специалисты:

  • педиатр;
  • гинеколог;
  • уролог;
  • дерматовенеролог;
  • инфекционист;
  • фтизиатр;
  • пульмонолог.

Генно-молекулярная диагностика успешно применяется в неонатологии. С помощью полимеразной цепной реакции выявляют возможное заражение младенцев внутриутробно и сразу после появления на свет. Для детей с риском инфицирования анализ проводят в первые 48 часов после рождения и повторно в возрасте 3-6 месяцев.

Кроме инфекционных заболеваний, Рolymerase Сhain Reaction помогает диагностировать наследственные аномалии и мутации. В перинатальный период методом ПЦР у будущего малыша можно обнаружить:

  • гемофилию – нарушение свертываемости крови;
  • болезнь Хантера – патологии обменных процессов;
  • мусковидоз – нарушение внешнесекреторной функции желез;
  • нервно-мышечную миодистрофию Дюшенна-Беккера;
  • первичный иммунодефицит;
  • синдром Альпорта – патологию почек.

PCR используют для определения мутантных генов и их РНК-продуктов в диагностике онкологических заболеваний. Высокая чувствительность молекулярного метода обеспечивает выявление онкопатологий в доклинической стадии, когда очаг опухоли не превышает 0,01 см3 в размерах.

По обнаруженным онкогенам, биологическим канцерогенам и антионкогенам диагностируют исходную стадию:

  • онкогематологических болезней (рака крови и лимфатической системы);
  • злокачественных образований молочных желез;
  • аденокарциномы толстой кишки;
  • меланомы;
  • рака ротоглотки;
  • наследственных форм рака.

Высокой онкогенностью обладают штаммы 16, 18, 31, 33, 35 ВПЧ (вируса папилломы человека). В 50% случаев вызывают карциному шейки матки у женщин – раковую опухоль эпителиальных клеток. Обнаружение неопластических клеток в доклинической стадии рака значительно повышает шансы на успешное лечение болезни.

Особую ценность ПЦР имеет для Службы крови. Метод позволяет определить заражение гепатитами, ВИЧ, сифилисом в бессимптомный инкубационный период. На этой стадии иммунная система еще не продуцирует антитела к возбудителям, и выявить заболевания с помощью серологических исследований невозможно.


Проверка донорской крови ПЦР предупреждает возможное инфицирование реципиента

Спектр возможностей ПЦР в диагностике инфекций

Анализ полимеразной цепной реакции крови используется для выявления ЗППП (заболеваний, передающихся половым путем) и урогенитальных инфекций, инфекционных болезней легких, печени, пищеварительной системы, так называемых, детских болезней.

Краткий перечень возбудителей и заболеваний, определяемых по крови, мазку и моче

Вирусы
герпесовирус 1 тип обычный герпес
2 тип генитальный герпес
3 тип краснуха
4 тип (цитомегаловирус) цитомегалия
5 тип (Эпштейн-Барр) инфекционный мононуклеоз
папилломы человека (21 штамм) папилломатоз
HAV, HBV, HCV гепатит А, В, С
иммунодефицита ВИЧ, СПИД
Бактерии
бледная трепонема сифилис
гарднереллы гарднереллез
гонококки гонорея
уреаплазма уреаплазмоз
сальмонелла сальмонеллез
палочка Коха туберкулез
листерия листериоз
стрептококки и стафилококки сепсис, пневмония, менингит
Паразиты, прокариоты, простейшие
описторхи (печеночные сосальщики) описторхоз
плазмодий малярия
токсоплазма токсоплазмоз
лямблии лямблиоз
хламидии хламидиоз
трихомонада трихомониаз
микоплазма микоплазмоз
эхинококки эхинококкоз
шистосомы шистосомоз
цестоды альвеококкоз

Комплексный анализ на ЗППП носит название «профиль ПЦР-12», по количеству определяемых возбудителей. В профиль входят половые инфекции:

  • хламидиоз;
  • гонорея;
  • трихомониаз;
  • сифилис;
  • ВИЧ;
  • обычный и генитальный герпес;
  • цитомегалия и инфекционный мононуклеоз;
  • папилломатоз;
  • гепатиты В, С.

А также микоплазмоз и уреаплазмоз – не относящиеся к венерическим болезням, но передающиеся при интимной близости. Отдельный анализ крови ПЦР на кандидоз (молочницу) практикуется редко, поскольку заболевание легко выявляется по мазку из влагалища (у мужчин из уретры).

Показания к проведению ПЦР-12

Прямыми показаниями являются симптоматические проявления, характерные для половых инфекций:

  • длительная фебрильная (38-39 ℃) температура тела;
  • увеличение лимфатических узлов;
  • кожная сыпь;
  • зудящие высыпания в области наружных половых органов;
  • поллакиурия (учащенное мочеиспускание), сопровождающаяся жжением в уретре;
  • боли в нижней части живота, иррадиирующие в поясницу;
  • диспареуния (болезненные ощущения во время интимной близости и после секса);
  • лейкоррея у женщин (неспецифические влагалищные выделения с неприятным запахом) и выделение слизи из уретры у мужчин.

ПЦР-12 рекомендовано пройти при планировании беременности.


Основные симптомы и осложнения половых инфекционных заболеваний

Основные достоинства PCR

Метод полимеразной цепной реакции применяется в совокупности с другими исследованиями или заменяет:

  • Микроскопию (обычную и люминесцентную) – изучение крови под микроскопом (люминесцентным микроскопом).
  • Бактериологический посев – высаживание биоматериала на питательные для паразитов, бактерий и т. д. среды, и выращивание в лабораторных условиях колоний болезнетворных микроорганизмов.
  • Серологические тесты – основаны на выявлении специфических антител (иммуноглобулинов) к антигену (инфекционному агенту): реакция иммунофлуоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

ПЦР используют для уточнения спорных диагнозов, при получении ложноположительных и ложноотрицательных результатов других анализов. Прерогативы ПЦР-диагностики:

  • Высокая точность типизации возбудителей. Оценка уникальных для каждого микроорганизма фрагментов ДНК и РНК дает возможность распознать конкретный штамм вируса, разновидность паразитов, грибков и бактерий.
  • Гиперчувствительность к инфекционным агентам. Чтобы обнаружить инфекцию, для ПЦР достаточно молекулярного присутствия патогенного микроорганизма.
  • Оперативность проведения анализа. В отличие, к примеру, от бакпосева для выполнения которого требуется 7-14 дней, результаты PCR можно получить через 24 часа (в платных диагностических центрах интервал ожидания может быть сокращен до 5-7 часов).
  • Универсальность. Диагностические возможности метода в области инфекционных болезней практически не ограничены.
  • Комплексность. Одного образца крови достаточно для проведения исследования на несколько патогенных микроорганизмов.
  • Специфичность. При проведении ПЦР исключены перекрестные реакции иммуноглобулинов с близкородственными не комплементарными антигенами, следовательно, невозможен ложноположительный результат исследования.

О недостатках Рolymerase Сhain Reaction можно говорить в свете высоких требований к оснащению лаборатории и квалификации медицинского персонала. Анализ проводится в условиях абсолютной стерильности, со строгим соблюдением температурного режима. Присутствие посторонних ДНК в воздухе может исказить результаты исследования.

Важно! Некоторые виды инфекционных агентов способны мутировать. Такое явление наблюдается редко, но изменение РНК-штамма может стать причиной ошибочной дифференциации. В остальных случаях ПЦР-диагностика близка к идеальной.

Подготовка к анализу крови методом полимеразной цепной реакции

Подготовительные мероприятия обеспечивают максимальную объективность результатов исследования. Правила подготовки к ПЦР анализу крови включают:

  • отказ от приема медикаментов за 5-7 дней до сдачи крови;
  • ограничение жирной пищи и исключение из рациона спиртных напитков за 2 дня;
  • сокращение физической активности накануне забора крови;
  • соблюдение режима голодания 8-12 часов (сдавать кровь необходимо натощак).

За час до процедуры рекомендуется отказаться от никотина (не курить). Забор крови производится из вены, в утренние часы. В современных лабораториях, имеющих условия для проведения ПЦР-диагностики, биоматериал берут при помощи стерильных вакутейнеров. Кровь пациента хранится в течение двух недель, что делает возможным проведение дополнительных тестов.


Пример бланка с результатами анализа

О результатах и ценах

Результаты исследования можно получить на следующий день. Количественный показатель, иначе, число полученных копий инфекционного агента, указывается редко. В большинстве случаев пациент получает бланк с качественной интерпретацией результата. Варианты могут быть:

  • «обнаружено» или «положительно» — наличие инфекционного заболевания;
  • «не обнаружено» или «отрицательно» — отсутствие заражения.

Положительный результат при отсутствии выраженных проявлений болезни свидетельствует о латентном бессимптомном течении инфекции или пребывании возбудителя в стадии инкубации. Исследование относится к средней ценовой категории.

В клиниках Москвы и других крупных городов стоимость определения одного вида инфекции варьируется от 300 до 500 руб. Комплексный анализ ПЦР-12, как правило, обходится дешевле, чем проверка на каждый возбудитель отдельно.

Закладка Постоянная ссылка.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *